徠卡顯微鏡作為全球光學(xué)技術(shù)的品牌，始終以精密工程與創(chuàng)新設(shè)計(jì)推動(dòng)人類對(duì)微觀世界的探索。誕生于19世紀(jì)中葉的德國韋茨拉爾，徠卡憑借百年光學(xué)積淀，將顯微鏡從實(shí)驗(yàn)室工具發(fā)展為跨學(xué)科研究的核心平臺(tái)，其產(chǎn)品覆蓋生命科學(xué)、工業(yè)檢測、醫(yī)療診斷、材料分析及文化遺產(chǎn)保護(hù)等領(lǐng)域，成為科學(xué)界與工業(yè)界信賴的“微觀之眼”。
徠卡顯微鏡是根據(jù)電子光學(xué)原理，用電子束和電子透鏡代替光束和光學(xué)透鏡，使物質(zhì)的細(xì)微布局在非常高的放大倍數(shù)下成像的儀器。原理是將電子流作為一種新的光源，使物體成像。有帶透射功效的電鏡，大型的徠卡顯微鏡多用于醫(yī)藥實(shí)驗(yàn)室。
一、設(shè)備組成與功能模塊
1.徠卡顯微鏡的典型配置包括以下核心組件：
?光學(xué)系統(tǒng)：物鏡(APO、PLAN等)、目鏡、聚光鏡、光源(LED/鹵素?zé)?。
?機(jī)械結(jié)構(gòu)：載物臺(tái)(手動(dòng)/電動(dòng))、調(diào)焦旋鈕(粗調(diào)/微調(diào))、物鏡轉(zhuǎn)盤。
?成像模塊：相機(jī)(單色/彩色)、顯示屏、軟件控制終端。
?擴(kuò)展功能：熒光濾光塊、DIC棱鏡、相差環(huán)等。
操作前準(zhǔn)備：
清潔載玻片與物鏡(使用專用鏡頭紙和清潔劑)。
開啟電源后預(yù)熱光源(鹵素?zé)粜桀A(yù)熱5分鐘，避免亮度突變)。
?2. 快速啟動(dòng)流程(以徠卡DM4 B為例)??
?放置樣本：將玻片固定于載物臺(tái)夾持器，確保樣本對(duì)準(zhǔn)光路中心。
?選擇物鏡：旋轉(zhuǎn)轉(zhuǎn)盤至低倍物鏡(如10×)，避免高倍鏡誤觸玻片。
?調(diào)整照明：
打開光源，調(diào)節(jié)亮度至適中(避免過曝)。
使用聚光鏡對(duì)中旋鈕，確保光斑居中。
?粗調(diào)聚焦：旋轉(zhuǎn)粗調(diào)旋鈕抬升載物臺(tái)，目視觀察直至出現(xiàn)模糊圖像。
?微調(diào)與觀察：使用微調(diào)旋鈕(精度0.1μm)清晰成像，切換不同區(qū)域或放大倍率。
二、多模態(tài)成像技術(shù)
徠卡顯微鏡支持多種觀察模式，需根據(jù)樣本特性選擇：
| ?模式? | ?適用場景? | ?操作要點(diǎn)? |
| ?明場（Brightfield）?? | 常規(guī)染色樣本（如HE染色組織） | 調(diào)節(jié)孔徑光闌與視場光闌提升對(duì)比度。 |
| ?相差（Phase Contrast）?? | 透明活細(xì)胞（如原代培養(yǎng)） | 匹配物鏡與聚光鏡相差環(huán)（Ph1/Ph2/Ph3）。 |
| ?熒光（Fluorescence）?? | 標(biāo)記蛋白/核酸（如GFP、DAPI） | 選擇對(duì)應(yīng)濾光塊，控制曝光時(shí)間避免光漂白。 |
| ?DIC（微分干涉）?? | 無染色細(xì)胞器觀察 | 調(diào)節(jié)棱鏡角度與偏光片，增強(qiáng)三維立體感。 |
三、核心技術(shù)
1.??復(fù)消色差物鏡
想象用普通放大鏡看東西會(huì)出現(xiàn)彩虹邊緣，這就是色差。徠卡的“黑科技”物鏡：
用??螢石玻璃??和特殊鏡片組合，消除顏色扭曲。
最高放大倍數(shù)可達(dá)??2000倍??，相當(dāng)于把頭發(fā)絲放大到游泳池那么粗。
分辨率達(dá)??0.2微米??，能看清比細(xì)菌（通常1-5微米）更小的結(jié)構(gòu)。
2.??智能照明系統(tǒng)??
普通臺(tái)燈照東西會(huì)有陰影，徠卡的??Köhler照明系統(tǒng)??：
通過多組透鏡讓光線均勻鋪滿整個(gè)視場。
自動(dòng)調(diào)節(jié)亮度，避免強(qiáng)光損傷活體樣本（如觀察心臟細(xì)胞跳動(dòng)）。
3.??熒光成像技術(shù)??
就像給細(xì)胞貼“熒光貼紙”：
用特定顏色的光照射樣本，標(biāo)記物會(huì)發(fā)出不同顏色的光（如綠色）。
能同時(shí)追蹤??8種以上??的生物分子，比如在癌細(xì)胞中標(biāo)記DNA、蛋白質(zhì)等。
四、顯微鏡家族的“三大金剛”
1.??生物顯微鏡??（如DM4B）
??用途??：學(xué)校實(shí)驗(yàn)室、醫(yī)院病理科常見。
??特點(diǎn)??：
可觀察染色切片（如腫瘤組織）。
配??相差環(huán)??能看到活體微生物（如草履蟲攝食過程）。
??放大倍數(shù)??：40-1000倍。
2.??體視顯微鏡??（如S9E）
??用途??：電子維修、考古文物觀察。
??特點(diǎn)??：
3D立體成像，適合看凹凸表面（如手機(jī)主板焊點(diǎn)）。
工作距離長（可達(dá)15cm），方便操作樣品。
??放大倍數(shù)??：10-100倍。
3.??超分辨顯微鏡??（如THUNDER）
??用途??：前沿科學(xué)研究。
??黑科技??：
突破物理衍射極限，看到??病毒表面蛋白（約20納米）??。
拍“3D電影”：記錄細(xì)胞分裂全過程，精度達(dá)毫秒級(jí)。
五、操作規(guī)程
1.配置顯微鏡：安裝顯微鏡和相應(yīng)的部件。
2.放置待觀察物體：需要保證待觀察物體在顯微鏡下。將物體放在玻璃載玻片上。
3.調(diào)節(jié)樣品：將載玻片調(diào)節(jié)到合適的位置，可以使用調(diào)焦手輪。
4.調(diào)節(jié)光源：使用燈光的適量量照明樣品，不至于過亮或過暗。
5.調(diào)節(jié)放大倍數(shù)：根據(jù)需要用合適的倍數(shù)調(diào)整目鏡和物鏡。
6.焦點(diǎn)調(diào)整：將載玻片調(diào)整到焦點(diǎn)位置，可以使用調(diào)焦手輪或移動(dòng)載玻片。
7.圖像調(diào)整：根據(jù)需要使用相應(yīng)的旋轉(zhuǎn)、調(diào)節(jié)等功能調(diào)整圖像。
六、使用顯微鏡的“冷知識(shí)”
??1.不要直接用酒精擦鏡頭??！
專用清潔劑是??乙醇??、醚+混合液（比例3:7），否則會(huì)溶解鏡片膠水。
2??.顯微鏡怕“感冒”??：
溫度每升高1℃，金屬部件會(huì)膨脹0.01mm，可能影響精度。實(shí)驗(yàn)室常年恒溫22℃±1℃。
3.??顯微鏡界的“變形金剛”??：
部分型號(hào)能秒切換觀察模式——按個(gè)鍵就能從看細(xì)胞變成看金屬裂紋。
七 、常見問題與解決方案?
| ?問題現(xiàn)象? | ?可能原因? | ?解決方法? |
| 圖像模糊或有色差 | 物鏡未卡入光路/鏡頭污染 | 旋轉(zhuǎn)物鏡至卡位，清潔鏡頭。 |
| 熒光信號(hào)弱 | 濾光塊不匹配/光源衰減 | 檢查濾光塊型號(hào)，更換老化光源。 |
| 軟件無法連接硬件 | 驅(qū)動(dòng)程序沖突/USB端口松動(dòng) | 重新安裝驅(qū)動(dòng)，更換數(shù)據(jù)線或USB接口。 |
| 電動(dòng)載物臺(tái)移動(dòng)卡頓 | 導(dǎo)軌積塵/電機(jī)過熱 | 清理導(dǎo)軌并涂抹專用潤滑脂，暫停使用冷卻電機(jī)。 |
